使用体细胞计数仪检测生乳的方法是那些，在检测过程当中需要使用到这些物品，这些物品的重要性是什么，在检测时有哪些需要注意的问题，下面仁创电子小编队为大家讲解!




1.1原理
将测试的鲜乳施加到载玻片上以形成膜，干燥，染色，并在显微镜下计数其细胞被亚甲蓝清楚染色的细胞。

1.2仪器和试剂

(1)仪器

显微镜：放大倍率╳500或╳1000，配有带刻度的目镜，千分尺和机械表;微量注射器;滑动;水浴;电炉砂芯漏斗电吹风;

(2)试剂

95%乙醇，四氯乙烷或三氯乙烷，亚甲基蓝，冰醋酸，硼酸。

1.3污渍准备

向250 ml烧瓶中加入54 ml乙醇和40 ml四氯乙烷，并摇匀。将混合物在65℃水浴中加热3分钟，取出后，加入0.6g亚甲蓝，并将混合物均匀混合。冷却后，将其置于冰箱中冷藏。取出后，加入6毫升冰醋酸，混合均匀，用砂芯漏斗过滤，然后将其放在室温下的试剂瓶中进行储存。

1.4样品制备

(1)收集的生乳应保存在2-6°C下。如果在6小时内未测量，则应添加硼酸以防止腐蚀。样品中的硼酸浓度不超过0.6 g / 100 mL。在没有冷藏条件(2-6°C)下存储不超过24小时。

(2)将原料奶在35°C水浴中加热5分钟，混合并冷却至室温以防止样品不均匀，例如脂肪漂浮。

(3)用乙醇洗涤玻片后，用镜纸干燥，用火焰烘烤，然后冷却至室温。

(4)通过微量注射取0.01ml样品，并将样品均匀地注射到周围的载玻片上，立即置于培养箱中，并水平放置5分钟以形成均匀厚度的膜。在电炉上烘烤干燥，将干燥后的样品膜在碎片上浸入染色溶液中10分钟，取出并干燥。将染色的样品膜浸入水中以洗去残留的染料溶液，然后干燥并以防尘方式储存。

1.5样品测定

(1)将载玻片固定在显微镜的载物台上，使用自然光或通过电光源，聚光镜和油浸大功率镜来增加透射光的强度。

(2)单向移动式机械站对每个视野中的载玻片上的染色体细胞进行计数，并且落入视野内或视野中身体一半以上的体细胞用于计数，并且计数的体细胞数量不少于400。(有关详细信息，请参阅NY / T 800-2004)

2,流式细胞仪

流式细胞仪(FCM)是一项在1970年代开发的技术，可以快速，准确和客观地检测和量化单个颗粒(通常是细胞)的多种特征。乳品行业主要使用流式细胞仪检测牛奶中的体细胞和细菌总数。

流式细胞仪是一种结合了激光技术，电子物理技术，光电测量技术，电子计算机和细胞荧光化学技术的新型高科技仪器。

其结构一般分为三部分：样品室和液流驱动系统;激光光源和光学系统;信号检测，存储，数据处理系统。

3,CMT诊断解决方案

CMT主要用于快速诊断患有隐性乳腺炎的泌乳牛，常规监测泌乳牛的乳房健康，筛查泌乳性母牛隐性乳腺炎的发生率以及评估新鲜牛奶卫生的质量水平。

原理是在表面活性剂和碱性药物的作用下，牛奶中的体细胞被破坏，DNA被释放以进一步起作用以沉淀或形成凝胶。体细胞越多，产生的沉淀或凝胶就越多，从而间接诊断出乳腺炎和炎症的程度。该方法是国际公认的隐性乳腺炎的诊断方法，其特点是操作简便，速度快。

1.使用方法

(1)从要检查的牛奶区域取样，丢弃前两个牛奶，将牛奶样品挤入检查杯中。

(2)倾斜测试盘(约60°C)，丢弃多余的牛奶，然后在杯子中测试约2 ml的牛奶样品。

(3)将2毫升用于奶牛的诊断试剂(稀释剂)添加到每个测试杯中。

(4)摇动水平同心圆并摇动10-30秒，以将牛奶样品与母牛诊断试剂充分混合。

2.评审标准

CMT与牛奶充分混合后，根据是否存在聚集体以及聚集体的量和性质进行判断。

负号(-)：细胞数为0-20,000 / ml：混合物为液体形式。当测试盘倾斜时，液体会平稳移动，并且杯底没有沉淀物。

可疑(±)：细胞数为15-500,000 / ml：混合物为液体形式。当测试盘倾斜时，杯底会出现少量沉淀物，沉淀即刻消失.

弱阳性(+)：细胞数量为40-150万/ ml：杯底出现少量稀薄的粘稠沉淀物，但不是凝胶状的。当测试盘倾斜时，沉积物会散布在培养皿的底部，并具有一定的附着力。

阳性(++)：细胞数量为80-500百万/ ml：杯子底部的沉淀物更多，也更厚，并且凝胶量少。当测试盘倾斜时，沉淀物会附着在杯子的底部。它很难流动，并且在摇动岩石时，沉淀物会出现居中现象。

强阳性(+++)：细胞数超过500万/ ml：当测试盘放置在培养皿中时，培养皿中的大多数或全部混合物形成透明的凝胶状聚集体，几乎完全粘附在培养皿底部旋转时，聚集体集中。该组很难散布。

酸性牛奶(y)：牛奶呈黄色和酸败，这是乳腺炎。

碱性牛奶(P)：牛奶为深紫色，伴随着牛奶产量减少，这是乳腺炎;当碱与牛奶混合时，牛奶很容易变成深紫色。

4,电导率法

牛奶的电导率与组成有关，尤其是氯化物和乳糖的含量。当牛奶中的氯离子含量增加或乳糖含量减少时，牛奶的电导率就会增加。

普通牛奶的电导率通常在20°C下为0.004-0.005S，如果超过0.006S，则被认为是病牛奶。

电导率乳腺炎测试仪

由于牛奶中含有盐，因此具有导电性。牛奶中的离子量会影响电导率，其中最重要的是钠，钾和氯。

当牛乳糖缺乏或乳腺炎由于乳酸或盐的产生而增加时，电导率高于正常牛奶。因此，电导率可用于间接检测乳腺炎牛奶。

5,粘度法

牛奶的粘度在20°C为0.0015-0.0020Pa.s。影响牛奶粘度的内在因素是牛奶中脂肪和蛋白质的含量。当脂肪和蛋白质含量高时，牛奶的粘度也高。干物质含量越高，牛奶的粘度越大。它会受到脱脂，灭菌和均质化的影响。

体细胞计数仪,同时，牛奶的粘度也受温度影响，并且当温度升高时粘度降低。温度低于60℃时，温度越高，粘度越小。当温度高于60℃时，蛋白质变性，并且温度越高，粘度越大。

另外，牛初乳，终端乳和病乳的粘度高于普通乳。因此，通过检测粘度可以间接反映体细胞的数量。

6,荧光光电计数

1.工作原理：

将原料奶中的体细胞进行荧光染色，在特殊的荧光作用下通过一系列透镜和滤光片进行处理，然后投射到透镜中，然后对样品进行拍照，读取，分析和显示。

其特点如下：

(1)可操作性高：易于操作，易于使用，结果准确，操作人员经过简单培训即可上岗。

(2)安全性：一次性微流控芯片可减少交叉污染的风险。

(3)图像显示：实时显示体细胞分布图像。

(4)支持软件：仪器内置的统计软件可以自动存储和分析测试数据。

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