摘 要：维生素a为一种重要的脂溶性物质，现阶段对该物质的含量测定方法主要有：薄层色谱法、分光光度法、液相色谱法、气相色谱法等，高效液相色谱法为一种操作简单、快速、灵敏、准确的测定维生素a的方法，本文从样品处理、色谱分离以及检测等几个方面对高效液相色谱色谱法测定牛奶及乳制品中维生素a的研究进行综述。
关键词：维生素a；高效液相色谱法；脂溶性
中图分类号：q493.6 文献标识码：a
维生素a属于一种重要的食品营养添加剂，在各类食品中尤其是乳制品中均有添加维生素a，从而实现对全球性的儿童维生素a缺乏这一严重的营养缺乏问题予以了有效的应对，出于对产品质量进行控制的目的，降低由于添加不合理而给健康带来的危害，因此应对产品中维生素a的质量展开准确的测定。本文对高效液相色谱色谱法测定牛奶及乳制品中维生素a的研究情况进行具体阐述，详见下文。
1 维生素a高效液相色谱测定
1.1 样品制备
近几年以来高效液相色谱法在奶粉、牛奶等乳制品中维生素a检测过程中得到了广泛的应用。然而在检测过程中样品处理为关键环节，现阶段乳制品样品处理过程主要涉及到以下几个方面：① 溶解均化。即对样品进行充分溶解，混合均匀，以便更加完全的进行萃取。② 蛋白质沉淀。由于样品中混有蛋白质会对检测结果产生一定程度的影响，因此应采取极性有机溶液降低蛋白质的溶解性，使其产生沉淀而达到分离的效果。常用的溶剂包括有丙酮、乙腈、甲醇以及乙醇等，溶剂的用量视具体情况而定，但是值得注意的是应尽量避免采取酸溶液。③ 维生素a的分离。在生乳中维生素a的存在形式为酯化，在乳脂肪中分布，因此在分离过程中多数会选择皂化处理，不但能够促进维生素a与脂肪发生脱离，而且能够将维生素a的酯转变成视黄醇。曾有研究指出，在对样品处理过程中可以采用脂肪酶处理，能够对皂化处理予以替代，将酯转化成视黄醇。④ 维生素a的萃取。现阶段常用的萃取方法主要包括有：液液萃取、加压溶剂萃取、固相萃取、超临界流体萃取等。
1.2 色谱分离
高效液相色谱法具有分离和定量分析功能，为检测乳制品中维生素a含量的一种常用手段，高效液相色谱分正相色谱和反相色谱两种形式。
1.2.1 正相色谱
对于正相色谱而言其固定性为极性物质，常用的有硅胶或经极性基团改性的硅胶，而洗脱液则是采用非极性溶剂，譬如说正己烷等，在进行洗脱的过程中，也可在洗脱液中加入少量的极性调节溶液，譬如说异丙醇或者是氯仿等。研究证实正相色谱对流动相的变化具有较高的敏感性，因此采取梯度洗脱时耗时较长，此为正相色谱的不足之处，因此在乳制品检测中比较少用。
1.2.2 反相色谱
反相色谱是利用在流动相与和极性洗脱液之间待分离物质的相分配实现的。一般情况下反相色谱的固定相为c18或c8，而洗脱液则是采取极性溶剂，譬如说水、甲醇、乙腈等，也可以是几种溶剂的混合溶剂。大量实验证实，反相色谱的稳定性较正相色谱高，因此在含量测定等方面的应用更加广泛。现阶段对于乳制品中维生素a的测定基本均采取反相色谱法。
1.3 检测
在维生素a经过色谱柱进行分离后需要接受定量检测，根据检测物质的结构与性质，现阶段较为常用的检测器包括有紫外检测仪、二极管阵列、用电化学法、荧光检测仪、质谱检测等。对于紫外检测而言，由于维生素a中存在多个共轭体系，因此能够对300nm-400nm范围内的紫外光产生较强吸收，一般情况吸收波长在325nm左右，现阶段在分析过程中紫外检测器的应用最为广泛，然近阶段有研究显示，二极管阵列的应用率正在逐渐增加，因其能够更加准确的对检测物质进行定性，并且可同时检测多种物质。
1.4 定性与定量
现阶段常用的定量法为内标法，其能够有效提高准确度与精度，然在检测维生素a时具有应用价值的内标物相对较少，所以一般较少应用，并且现阶段市面上的维生素a的标准样纯度较高，并且色谱仪器的精密度也十分理想，因此外标法能够对分析要求予以充分的满足，在维生素a检测中多数采取外标法进行定量。
2 存在的问题
由于经济的发展，科技水平不断提高，使得分析仪器以及分析方法不断进行改进，近几年分析水平得到了很大程度的提高，对乳制品中维生素a含量的检测技术也已经日趋成熟。然而依旧存在一些需要进一步解决的问题，在诸多问题中，最为显著的便是对维生素a的各种异构体进行检测，尽管曾有相关的实验尝试对各种异构体的检测进行合理解决，然而还不够成熟。经分析研究得知，主要存在以下两种障碍：对各种异构体的标准样品比较缺乏；样品中各种异构体纯度不够，并且会在短时间内发生相互转化，稳定性较差含量测定无法得到准确结果。
结语
综上所述，现阶段对于乳制品中维生素a的检测主要依赖高效液相色谱法，且多数采用反相色谱法，在检测过程中应严格按照操作规程进行，做好样品处理工作，对检测器、流动相、固定相以及定量分析方法等进行合理的选择，从而保证检测结果的准确性。并应继续展开维生素a异构体检测的研究，使分析方法能够得到完善，更好的为改善乳制品质量水平提供保障。
